2022-08-08 瀏覽次數(shù)：2122
流式細(xì)胞術(shù)是當(dāng)代細(xì)胞分析技術(shù)之一，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞內(nèi)/外抗原分子檢測、細(xì)胞中DNA和RNA的倍體分析、細(xì)胞的生物學(xué)特性及功能分析等。
對于流式細(xì)胞分析而言，樣本制備的好壞對最終的檢測結(jié)果有很大的影響。在免疫學(xué)和血液學(xué)中，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析的樣本多為外周血、骨髓、各類體液（如腦脊液、胸水、腹水）以及人體的組織（如淋巴結(jié)、脾、肝等），這幾種樣本要如何制備和保存呢？
保存方法
收集樣本后置于加有抗凝劑（一般選擇肝素或EDTA）的試管中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無法及時(shí)處理，4℃保存，此時(shí)最好選擇肝素抗凝管。
處理方法
一般不需要特殊處理制備單細(xì)胞懸液，所用試劑為淋巴細(xì)胞分離液和紅細(xì)胞裂解液。但在臨床檢測中，為了避免細(xì)胞成分丟失，通常不推薦使用淋巴細(xì)胞分離液分離單核細(xì)胞。
抗凝劑的選擇
血液標(biāo)本可以使用EDTA、ACD（枸櫞酸葡萄糖）或肝素抗凝。
一般認(rèn)為，ACD和肝素抗凝的樣本72 h內(nèi)細(xì)胞是穩(wěn)定的；EDTA抗凝48 h內(nèi)是穩(wěn)定的。
EDTA適用于白細(xì)胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系細(xì)胞貼壁造成細(xì)胞損失，并具有較強(qiáng)的抗血小板凝集能力，但對細(xì)胞活性的保持不如肝素抗凝。同時(shí)EDTA是二價(jià)陽離子的強(qiáng)螯合劑，會影響與Ca2+相關(guān)的抗原位點(diǎn)（如CD11b等），并會抑制與Ca2+ 相關(guān)的細(xì)胞功能。肝素常用于白細(xì)胞功能研究，可維持Ca2+和Mg2+在細(xì)胞內(nèi)的生理濃度，更好保持細(xì)胞活性，適用于放置時(shí)間較長、不能及時(shí)檢測的樣本，但不適合血小板的相關(guān)檢測。
骨髓樣本優(yōu)先選擇肝素抗凝。
體液
保存方法
收集樣本后置于肝素抗凝管中，室溫保存，且盡量在12 h內(nèi)處理樣本。若無法及時(shí)處理，則4℃保存，時(shí)間最好不超過48 h。
處理方法
樣本1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；
加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS），離心洗滌5 min；
加入適量PBS重懸。如有細(xì)小沉淀，用300目尼龍網(wǎng)過濾后備用。
保存方法
切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無法及時(shí)處理，4℃保存，保存時(shí)間最好不要超過48 h。不建議用甲醛、乙醇固定細(xì)胞，不要用酶、表面活性劑處理細(xì)胞。
處理方法
常用的組織樣本制備單細(xì)胞懸液方法有：機(jī)械法、酶處理法、化學(xué)試劑處理法及表面活性劑處理法，在流式分析中，為保持抗原活性，多采用機(jī)械法處理樣本。采用機(jī)械法需注意動作輕柔，盡量減少細(xì)胞的損傷。
若實(shí)驗(yàn)室無單細(xì)胞制備儀，手工剪切制備單細(xì)胞懸液：
PBS清洗組織樣本，去除大量紅細(xì)胞；
用眼科剪將組織剪成極小塊，再次PBS清洗；
組織小塊加入勻漿器中，加少量PBS勻漿；
用細(xì)注射針頭抽取細(xì)胞懸液；
300目尼龍網(wǎng)過濾；
加入含0.1%牛血清白蛋白的PBS；
1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；
加入適量PBS重懸。