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那么硬骨素試劑盒在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需注意什么?
2021-03-18 瀏覽次數(shù)：1398
硬骨素試劑盒——骨轉(zhuǎn)換的檢測(cè)標(biāo)識(shí)骨重建是骨吸收和更新的生命協(xié)調(diào)過(guò)程，它在重建骨骼的同時(shí)維持其骨架。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞是專門負(fù)責(zé)這個(gè)過(guò)程的細(xì)胞。近年來(lái)，檢測(cè)和塑造參與骨代謝調(diào)控通路的分子，已取得重大進(jìn)展。這些發(fā)現(xiàn)反過(guò)來(lái)又促進(jìn)了反映骨形成或骨吸收的新的生化標(biāo)識(shí)物的發(fā)展。這些標(biāo)識(shí)物有利于骨代謝疾病和骨質(zhì)疏松癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病藥物發(fā)展的病理生理過(guò)程的調(diào)查。}
那么硬骨素試劑盒實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需注意什么：
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣
2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將30（48t的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48t的20倍）倍稀釋后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（od值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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